目前仍未发现ALS的生物学标志物，也不存在能确定ALS的辅助检查方法。但是，对于临床上怀疑可能的ALS患者，需完善必要的辅助检查，排除其他疾病，协助ALS的诊断。

1、实验室检查：血液学检查包括常规、生化、肌酸激酶、红细胞沉降率(ESR)及风湿免疫学指标、甲状腺功能、蛋白电泳、神经节苷脂GM-1抗体、肿瘤标志物等;脑脊液检查包括：常规、生化、神经节苷脂GM-1抗体、寡克隆带等;

2、神经电生理检查(肌电图及神经传导)：神经电生理检查是ALS诊断中非常关键的辅助检查手段。肌电图可确定下运动神经元的损害，在临床上尚未受累的区域尤为重要。故临床上怀疑ALS的患者要寻找4个部位(球部、颈、胸、腰骶)的临床下证据。目前，胸锁乳突肌、椎旁肌、腹直肌肌电图逐渐成熟，使得寻找4个部位神经源性损害临床下证据成为可能。ALS患者肌电图最常见的异常是肌束颤动和自发性失神经放电(纤颤电位和正锐波)，代表运动神经元的进行性丢失，即急性损害;小力收缩时出现巨大电位(时限增宽、波幅增大)、多相电位，大力收缩时出现单纯相提示运动神经再支配，即运动神经元的慢性损害。若患者同时存在运动神经元的急性和慢性损害、受累广泛，且感觉大致正常，则从辅助检查角度支持运动神经元病的诊断。随着神经电生理技术的不断进步，一些新的检查手段也为 ALS的诊断提供了帮助，如运动诱发电位(MEP)有助于确定患者亚临床的上运动神经元损害。虽然纤颤电位和正锐波在1/3的运动神经元丢失时才会出现，但仍早于临床表现，故上述检查有助于ALS的早期诊断。

3、影像学检查：脑和脊髓 MRI是ALS必要的检查项目，主要用于排除类似于ALS的综合征。在一些ALS患者中，T2加权相、液体衰减反转恢复相(Flair相)和质子密度加权相(DWI相)序列中显示沿着皮质脊髓通路及中央和额叶皮层有明显的高信号全面聚集。但这些MRI表现非ALS特异性，与疾病严重程度和上运动神经元体征存在的相关性较弱，对疾病进展也并非有用的指标。更先进的MRI技术包括弥散张量成像、磁共振波谱等，是发现皮质脊髓通路病变的新技术，目前主要用于研究，具有一定的发展潜能。因ALS患者会伴有FTD，故皮层厚度等检测手段也有助于疾病的诊断及研究。

4、基因检测：遗传因素是ALS的病因及发病机制之一，有约10%的ALS患者具有阳性家族史。所以，对具有阳性家族史的ALS患者进行基因检测有利于遗传学诊断及亲属的遗传咨询。在未来，对ALS患者遗传学的进一步研究，也会为寻找该病的发病机制及可能的治疗手段提供有力的帮助。

5、肌肉活检：临床诊断较为明确或倾向性较大的患者无需进行肌肉活检，肌肉活检并非诊断ALS必须检查，但若患者存不支持ALS的临床表现，可根据需要进行肌肉活检，目的是与其他疾病鉴别。

ALS患者肌肉活检可由如下表现：

(1)诊断所需表现：在受累肌肉慢性失神经支配及再支配的证据。

(2)符合诊断而不能排除诊断的表现：分散肥大的肌纤维;不超过中度的靶向化纤维;不超过轻-中度的I型纤维群组化;小量坏死肌纤维的出现。

(3)排除诊断或提示其他疾患的表现：明显的单克隆丙种球蛋白病，淋巴细胞核其他单核炎性细胞浸润;明显的血管炎;显著数量的肌纤维伴有如下结构改变：坏死、边缘空泡、线状体、核中央化、线粒体堆积(破碎红纤维);大量肌纤维群组化;肌肉内神经出现由于神经微丝堆积造成的大轴索肿胀，但没有PAS染色阳性小体。