脑水肿与缺血性脑血管疾病的致残率、病死率有很大关系。水通道蛋白(AQPs) 可能在脑组织水转运过程中起关键作用，与脑水肿的发生密切相关[1]。本研究采用大鼠缺血再灌注模型，研究不同的缺血时间与再灌注时间影响下AQP4的表达变化及其可能的意义。清华大学玉泉医院神经外科孙基栋

材料和方法

一、大鼠分组

健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠91只,体重230±20 g。随机分为假手术组(7只)和脑缺血再灌注组(84只);脑缺血再灌注组又分为脑缺血2h、3h、6h后再灌12h、24h、3d、7d，共12个亚组(每组7只)。

二、缺血再灌注模型制备

采用改良的Longa线栓法建立大鼠局灶脑缺血再灌注模型。10 %水合氯醛(400mg/ kg) 溶液腹腔注射，麻醉大鼠。颈部正中纵向切口，充分暴露左侧颈总动脉，分离颈外动脉及颈内动脉，在颈外动脉根部结扎颈外动脉;近心端结扎左侧颈总动脉，动脉夹夹闭颈总动脉远端，在结扎线和动脉夹之间的颈总动脉上剪一小切口，切口远端打一松扣，将一头端烧成球形的直径0.165mm的尼龙线插入切口，缚紧切口远端之丝线，松开动脉夹，将钓鱼线缓慢向颈内动脉入颅的方向推进，至有阻力不能再进为止。将尼龙线尾端留在皮外，再灌注时拔出插线。假手术组除不进线外,全过程同缺血组。按照 Longa的5分法进行神经病学评分: 0 分，无神经缺损症状，活动正常;1 分，右前肢不能完全伸直;2 分，侧推抵抗力减弱，向右旋转;3 分，向右侧倾倒;4 分，不能自发行走，意识丧失。其中，0分和4分者被剔除，随机补充，保持每组7只不变。

三、脑组织处理及免疫组化

将各组大鼠于各相应时间点以10%水合氯醛腹腔注射深度麻醉，打开胸腔充分暴露心脏，经右心室插管至主动脉，固定插管并剪开右心耳，先用100ml 0.9%温生理盐水经插管冲洗血管内血液，至右心耳流出的液体澄清后，再灌注4%的多聚甲醛200ml，断头取脑，固定、脱水、石蜡包埋，常规HE染色及免疫组化检测。小鼠抗大鼠AQP4单克隆抗体AQP4(浓度1∶100)购于Santacruz公司。实验过程严格按照试剂盒说明进行。以PBS缓冲液代替一抗作阴性对照。

四、统计学处理

大鼠AQP4免疫组化图像分析: 光镜下对每张切片于梗死灶周边半暗带选择10个高倍视野，用计算机图像分析处理软件Motic images advanced 3.0检测受检区AQP4显色的面积比(即阳性区面积与总面积的比例)。

采用SPSS11.5统计软件进行统计学处理。数据均以 表示。采用析因设计的方差分析，P < 0.05表示有统计学意义。

结 果

一、HE染色结果

假手术组，未见神经元病理组织学改变。缺血再灌注组：梗死灶主要位于大鼠左侧大脑顶叶、颞叶及基底节区，呈典型的液化性坏死改变。随着缺血时间的延长神经毡溶解增加，组织疏松淡染，大量神经元坏死消失，残存神经元胞体缩小，胞核固缩呈三角形，核仁消失。

二、免疫组化染色结果

AQP4 在假手术组鼠脑主要在脑实质内血管周围星形胶质细胞 (图1)，侧脑室及第三脑室室管膜细胞、脉络从上皮细胞(图2)呈阳性表达，未见神经元着色。缺血组梗死灶中心无表达，而在梗死灶周围高表达，主要表达于血管周围星形胶质细胞，部分神经元也可见阳性表达(图3)。

三、统计学分析结果

缺血再灌注各组脑内AQP4表达较假手术组均明显升高。在缺血与再灌注双重因素影响下，AQP4蛋白表达与缺血时间、再灌注时间均有相关性(表1-2，图4，p值分别为p