软下疳根据发病前的性接触史，尤其是不洁性交史，典型的临床表现和经过，较短的潜伏期后发生软而扁的丘疹、脓疱、溃疡，单侧性的化脓性淋巴结炎，直接镜检和培养检出杜克雷嗜血杆菌，PCR检测杜克雷嗜血杆菌DNA，即可作出诊断。 软下疳的诊断依据：Barber氏对本病诊断作如下建议，并作为诊断标准：①阴部溃疡，一个或多个;②暗视野显微镜检查，梅毒螺旋体阴性;③梅毒血清试验阴性;④病损潜行性边缘取材涂片，用瑞氏染色未发现朵诺凡小体(肉芽肿荚膜杆菌)，而用革兰氏染色可找到短小的革兰氏阴性杆菌。